que es secuenciacion?

Una técnica propia de la Ingeniería Genética es la determinación de la secuencia de nucleótidos de un ADN, conocida como secuenciación de dicho ácido nucléico. Se ha conseguido gracias a las enzimas de restricción y a la posibilidad de obtener numerosas copias de un ácido nucléico por clonación. Se pueden conseguir muchos fragmentos, de diversos tamaños y lo que se trata es de recomponer la molécula original como si se tratase de un puzzle. Así se han secuenciado genes, desde virus hasta el genoma humano. El método más usado para la secuenciación es el conocido como técnica de terminación de cadena de Sanger, la cual se ha perfeccionado conociéndose actualmente como la técnica del didesoxi.

Se denomina así por ser necesario los didesoxirribonucleótidos (figura1), que han perdido su grupo alcohol OH del carbono 3'. En la figura 2 vemos un nucleótido normal con el grupo alcohol en el carbono 3'.

 

Como los nucleótidos se unen por este grupo OH del carbono 3', hay que pensar que si nos encontramos con un didesoxinucleótido será imposible que se una otro nucleótido y la cadena terminará aquí
Abreviadamente, éste sería el método a seguir: Como la técnica se basa en la síntesis de ADN, para hacer la reacción de secuenciación se necesita:
• Como "molde" se utiliza una de las cadenas del fragmento de ADN que se va a secuenciar.

Se necesita un "cebador" (pequeña hebra de ADN de reducido número de nucleótidos) para iniciar la síntesis. Es un corto oligonucleótido complementario del extremo de la cadena.

• También desoxinucleótidos de las cuatro bases: dAMP, dTMP, dGMP, dCMP.
• Por último didesoxirribonucleótidos de una base en cada una de las cuatro reacciones de secuenciación: didesoxi de ADENINA (ddATP) didesoxi de TIMINA (ddTTP) didesoxi de CISTEINA (ddCTP) didesoxi de GUANINA (ddGTP)